Curso Bioquímica Veterinaria

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Este curso se creó con el fin de Fortalecer los conocimientos sobre los diferentes análisis de laboratorio clínico, su aplicabilidad y correlación con las diferentes patologías en animales 

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Curso online Analisis del Semen en el Laboratorio Clínico

 

El análisis del semen en el laboratorio  es de gran importancia  para el diagnóstico para problemas de infertilidad  y otros factores relacionados con con los órganos de reproducción  masculina. 

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te invitamos  a participar  en este curso donde abordaremos los siguientes contenidos 

• Actualización de los a nuevos estándares  en el análisis del semen en el laboratorio. 
• Toma de muestra  ,transporte,conservación  de la muestra.
• Control de calidad en el laboratorio. 
• Procedimiento  por parte del técnico  de laboratorio  desde el examen físico, Quimico y Microscopio, 
• Interpretación  de resultado,reporte del seminograma. 

PRUEBA DE COOMB

 INTRODUCCIÓN:

- La prueba de Coombs también se conoce como prueba de antiglobulina. La prueba de Coombs busca anticuerpos que puedan adherirse a los glóbulos rojos y hacer que los glóbulos rojos mueran demasiado pronto.

- Fue descubierto por Coombs, Mourant y Race en 1945. El reactivo de Coombs es globulina antihumana.

- Se elabora mediante la inyección de globulina humana en animales, que producen anticuerpos policlonales específicos para inmunoglobulinas humanas y factores del sistema del complemento humano.

PRINCIPIO:

- Los glóbulos rojos recubiertos con complemento o anticuerpos IgG no se aglutinan directamente cuando se centrifugan.

- Se dice que estas células están sensibilizadas con IgG o complemento. Para que se produzca la aglutinación, debe añadirse al sistema un anticuerpo adicional, que reacciona con la porción Fc del anticuerpo IgG, o con el componente C3b o C3d del complemento.

- Esto formará un "puente" entre los anticuerpos o el complemento que recubre los glóbulos rojos, provocando la aglutinación.

TIPOS DE PRUEBA DE COOMB:

1. Prueba de Coomb directa

2. Prueba de Coomb indirecta

1. PRUEBA DE COOMB DIRECTA:

INTRODUCCIÓN:

- La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos (IgG o C3) que se adhieren a la superficie de los glóbulos rojos. Muchas enfermedades y medicamentos pueden causar esto. Estos anticuerpos a veces destruyen los glóbulos rojos y causan anemia.

- Esta es la prueba que se realiza en la muestra de sangre del recién nacido, generalmente en el contexto de un recién nacido con ictericia. Las dos formas más comúnmente reconocidas de hemólisis mediada por anticuerpos en los recién nacidos son la incompatibilidad Rh y la incompatibilidad ABO.

PROCEDIMIENTO:

1. Prepare una suspensión al 5% en solución salina isotónica de los glóbulos rojos a analizar.

2. Con una pipeta limpia, agregue una gota de la suspensión celular preparada a un tubo pequeño.

3. Lavar tres veces con suero fisiológico para eliminar todos los restos de suero.

4. Decantar completamente después del último lavado.

5. Agregue dos gotas de suero antihumano.

6. Mezclar bien y centrifugar durante un minuto a 1500 RPM.

7. Resuspenda las células agitando suavemente y examínelas macroscópicamente y microscópicamente en busca de aglutinación.

2. PRUEBA DE COOMB INDIRECTA:

INTRODUCCIÓN:

- La prueba de Coombs indirecta busca anticuerpos que fluyen libremente contra ciertos glóbulos rojos. Con mayor frecuencia se hace para determinar si puede tener una reacción a una transfusión de sangre.

- Esta es la prueba que se realiza en la muestra de sangre de la madre como parte de sus laboratorios prenatales. Con frecuencia denominada "detección de anticuerpos", esta prueba identifica una larga lista de antígenos menores que podrían causar problemas en los recién nacidos o causar problemas en la madre si es necesaria una transfusión.

- Aproximadamente el 5% de los pacientes tienen un IAT positivo debido a anticuerpos IgG, anticuerpos IgM o ambos.

PROCEDIMIENTO:

1. Etiquete tres tubos de ensayo como T (suero de prueba), PC (control positivo) y NC (control negativo).

2. En el tubo etiquetado como T (Prueba), tome 2 gotas de suero de prueba.

3. En el tubo de ensayo etiquetado como PC (control positivo), tome 1 gota de suero anti-D.

4. En el tubo de ensayo etiquetado como NC (control negativo), tome 1 gota de solución salina normal.

5. Agregue una gota de suspensión salina al 5% de las células positivas agrupadas "O" Rho (D) en cada tubo.

6. Incubar los tres tubos durante una hora a 37 ° C.

7. Lavar las células tres veces en solución salina normal para eliminar el exceso de suero sin anticuerpos libres (en el caso de un lavado inadecuado de los glóbulos rojos, se pueden obtener resultados negativos).

8. Agregue dos gotas de suero de Coombs (suero antihumano) a cada tubo.

9. Mantener durante 5 minutos y luego centrifugar a 1500 RPM durante un minuto.

10. Resuspenda las células y examínelas tanto macroscópicamente como microscópicamente.

RESULTADOS:

1. NEGATIVO:

- Sin aglutinación de células (sin aglutinación). Esto significa que no tiene anticuerpos contra los glóbulos rojos.

2. POSITIVO:

- La aglutinación (aglutinación) de los glóbulos rojos durante una prueba de Coombs directa significa que tiene anticuerpos en los glóbulos rojos y que puede tener una afección que causa la destrucción de glóbulos rojos por su sistema inmunológico (hemólisis). Esto puede deberse a

- Anemia hemolítica,

- Leucemia linfocítica crónica o trastorno similar,

- Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica del recién nacido),

- Mononucleosis infecciosa,

- Infección por micoplasma,

- Sífilis,

- Lupus eritematoso sistémico y

- Reacción a la transfusión, como una debida a unidades de sangre que no coinciden correctamente.

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Microbiología

 

Ensayo de macrodilución en caldo que muestra vancomicina y Staphylococcus aureus. La concentración inhibitoria mínima (MIC) es de 1.0 µg / mL. La placa de pureza muestra un cultivo puro. La placa de recuento de colonias muestra 53 colonias, lo que significa que 5,3 x 10⁵ unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro estaban en los tubos de ensayo inmediatamente después de la inoculación de los tubos de ensayo MIC. Para la placa de recuento de colonias, inmediatamente después de la inoculación, el tubo de control de crecimiento se diluyó 1: 1000 y se sembraron 0,1 ml. Ahora se colocarán en placa 0,01 ml de cada tubo transparente (tubos que contienen de 1,0 a 128 µg / ml de vancomicina) para la determinación de la concentración bactericida mínima. Debido a que se demostró que el recuento real de colonias en la prueba de CMI fue de 5.3 × 10⁵ CFU / mL, el crecimiento de cinco colonias o menos indicaría una disminución de 3 log10, o una muerte del 99.9%. Por definición, la concentración de fármaco en el tubo respectivo se consideraría bactericida.

PRUEBA DE WIDAL:

La prueba de Widal es una prueba de aglutinación que detecta la presencia de anticuerpos en el suero del paciente producidos contra los agentes causantes de la fiebre entérica (Salmonella Typhi y Salmonella Paratyphi A, B y C).

- Es uno de los métodos habituales empleados para el diagnóstico serológico de la fiebre tifoidea y paratifoidea, especialmente en las regiones endémicas.

PRINCIPIO:

- Los individuos infectados con Salmonella Typhi o S. paratyphi producen anticuerpos contra antígenos somáticos (O) y / o antígenos flagelares (H). Estos anticuerpos producidos en suero, si se exponen a una suspensión bacteriana que lleva antígenos homólogos, dan como resultado la aglutinación. La reacción de aglutinación puede verse como un agrupamiento visible.

- En la prueba, el suero del paciente se mezcla con una suspensión bacteriana muerta de Salmonella que porta antígenos O, H, AH y BH específicos y se observa la reacción de aglutinación. Si el suero del paciente contiene anticuerpos específicos contra los antígenos, la formación de grumos es evidente, lo que indica una prueba positiva. La ausencia de aglutinación indica un resultado negativo.

REQUISITOS:

- Suero fresco,

- kit que contiene antígeno de Salmonella (antígenos O, H, AH y BH),

- control positivo,

- Tarjeta de prueba Widal o portaobjetos,

- Varilla aplicadora.

PROCEDIMIENTO:

- La prueba Widal se puede realizar de dos formas-

1. Prueba rápida en portaobjetos: puede ser cualitativa o cuantitativa y realizarse en portaobjetos.

2. Prueba en tubo: Se realiza en tubos, es cuantitativa y requiere incubación. Se considera más confiable que la prueba de portaobjetos.

1. PRUEBA DE DIAPOSITIVAS:

1. Coloque una gota de control positivo en uno de los círculos de reacción del portaobjetos.

2. Pipetee una gota de solución salina isotónica en el siguiente círculo de reacción. (Control negativo).

3. Pipetee una gota del suero del paciente a analizar en los cuatro círculos de reacción restantes.

4. Añada una gota de suspensión de antígeno Widal TEST "H" a los dos primeros círculos de reacción. (PC y NC).

5. Aplique una gota de cada uno de los antígenos "O", "H", "AH" y "BH" a los cuatro círculos de reacción restantes.

6. Mezcle el contenido de cada círculo de manera uniforme en todo el círculo con varillas para mezclar separadas.

7. Agite el portaobjetos, suavemente hacia adelante y hacia atrás y observe la aglutinación macroscópicamente en un minuto.

2. MÉTODO DE TUBO:

1. Tome 4 juegos de 8 tubos Kahn / tubos de ensayo y etiquételos del 1 al 8 para la detección de anticuerpos O, H, AH y BH.

2. Pipetee en el tubo nº 1 de todos los juegos 1,9 ml de solución salina isotónica.

3. A cada uno de los tubos restantes (2 a 8) agregue 1.0 ml de solución salina isotónica.

4. En el tubo nº 1 de cada fila, añada 0,1 ml de la muestra de suero a analizar y mezcle bien.

5. Transferir 1,0 ml del suero diluido del tubo n ° 1 al tubo n ° 2 y mezclar bien.

6. Transferir 1,0 ml de la muestra diluida del tubo n. ° 2 al tubo n. ° 3 y mezclar bien. Continúe con esta dilución en serie hasta el tubo número 7 en cada juego.

7. Desechar 1,0 ml del suero diluido del tubo nº 7 de cada juego.

8. El tubo N ° 8 en todos los conjuntos sirve como control de solución salina. Ahora la dilución de la muestra de suero lograda en cada conjunto es la siguiente: Núm. De tubo: 1 2 3 4 5 6 7 8 (control) Diluciones 1:20 1:40 1:80 1: 160 1: 320 1: 640 1 : 1280.

9. A todos los tubos (1 a 8) de cada juego, agregue una gota de la suspensión de antígeno WIDALTEST respectiva (O, H, AH y BH) de los viales de reactivo y mezcle bien.

10. Cubra los tubos e incube a 37 ° C durante la noche (aproximadamente 18 horas).

11. Desaloje el botón sedimentado con cuidado y observe si hay aglutinación.

RESULTADO:

1. POSITIVO:

Aglutinación en un minuto

2. NEGATIVO:

Sin aglutinación indicativa de ausencia de niveles clínicamente significativos del anticuerpo correspondiente en el suero del paciente.

VENTAJAS:

- Es una prueba rápida para el cribado de fiebre entérica en áreas endémicas.

- Cuando las instalaciones de cultivo no están disponibles, la prueba de Widal es útil.

- Puede detectar infecciones causadas tanto por Salmonella Typhi como por Salmonella Paratyphi.

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