La prueba de Widal es una prueba de aglutinación que detecta la presencia de anticuerpos en el suero del paciente producidos contra los agentes causantes de la fiebre entérica (Salmonella Typhi y Salmonella Paratyphi A, B y C).
- Es uno de los métodos habituales empleados para el diagnóstico serológico de la fiebre tifoidea y paratifoidea, especialmente en las regiones endémicas.
PRINCIPIO:
- Los individuos infectados con Salmonella Typhi o S. paratyphi producen anticuerpos contra antígenos somáticos (O) y / o antígenos flagelares (H). Estos anticuerpos producidos en suero, si se exponen a una suspensión bacteriana que lleva antígenos homólogos, dan como resultado la aglutinación. La reacción de aglutinación puede verse como un agrupamiento visible.
- En la prueba, el suero del paciente se mezcla con una suspensión bacteriana muerta de Salmonella que porta antígenos O, H, AH y BH específicos y se observa la reacción de aglutinación. Si el suero del paciente contiene anticuerpos específicos contra los antígenos, la formación de grumos es evidente, lo que indica una prueba positiva. La ausencia de aglutinación indica un resultado negativo.
REQUISITOS:
- Suero fresco,
- kit que contiene antígeno de Salmonella (antígenos O, H, AH y BH),
- control positivo,
- Tarjeta de prueba Widal o portaobjetos,
- Varilla aplicadora.
PROCEDIMIENTO:
- La prueba Widal se puede realizar de dos formas-
1. Prueba rápida en portaobjetos: puede ser cualitativa o cuantitativa y realizarse en portaobjetos.
2. Prueba en tubo: Se realiza en tubos, es cuantitativa y requiere incubación. Se considera más confiable que la prueba de portaobjetos.
1. PRUEBA DE DIAPOSITIVAS:
1. Coloque una gota de control positivo en uno de los círculos de reacción del portaobjetos.
2. Pipetee una gota de solución salina isotónica en el siguiente círculo de reacción. (Control negativo).
3. Pipetee una gota del suero del paciente a analizar en los cuatro círculos de reacción restantes.
4. Añada una gota de suspensión de antígeno Widal TEST "H" a los dos primeros círculos de reacción. (PC y NC).
5. Aplique una gota de cada uno de los antígenos "O", "H", "AH" y "BH" a los cuatro círculos de reacción restantes.
6. Mezcle el contenido de cada círculo de manera uniforme en todo el círculo con varillas para mezclar separadas.
7. Agite el portaobjetos, suavemente hacia adelante y hacia atrás y observe la aglutinación macroscópicamente en un minuto.
2. MÉTODO DE TUBO:
1. Tome 4 juegos de 8 tubos Kahn / tubos de ensayo y etiquételos del 1 al 8 para la detección de anticuerpos O, H, AH y BH.
2. Pipetee en el tubo nº 1 de todos los juegos 1,9 ml de solución salina isotónica.
3. A cada uno de los tubos restantes (2 a 8) agregue 1.0 ml de solución salina isotónica.
4. En el tubo nº 1 de cada fila, añada 0,1 ml de la muestra de suero a analizar y mezcle bien.
5. Transferir 1,0 ml del suero diluido del tubo n ° 1 al tubo n ° 2 y mezclar bien.
6. Transferir 1,0 ml de la muestra diluida del tubo n. ° 2 al tubo n. ° 3 y mezclar bien. Continúe con esta dilución en serie hasta el tubo número 7 en cada juego.
7. Desechar 1,0 ml del suero diluido del tubo nº 7 de cada juego.
8. El tubo N ° 8 en todos los conjuntos sirve como control de solución salina. Ahora la dilución de la muestra de suero lograda en cada conjunto es la siguiente: Núm. De tubo: 1 2 3 4 5 6 7 8 (control) Diluciones 1:20 1:40 1:80 1: 160 1: 320 1: 640 1 : 1280.
9. A todos los tubos (1 a 8) de cada juego, agregue una gota de la suspensión de antígeno WIDALTEST respectiva (O, H, AH y BH) de los viales de reactivo y mezcle bien.
10. Cubra los tubos e incube a 37 ° C durante la noche (aproximadamente 18 horas).
11. Desaloje el botón sedimentado con cuidado y observe si hay aglutinación.
RESULTADO:
1. POSITIVO:
Aglutinación en un minuto
2. NEGATIVO:
Sin aglutinación indicativa de ausencia de niveles clínicamente significativos del anticuerpo correspondiente en el suero del paciente.
VENTAJAS:
- Es una prueba rápida para el cribado de fiebre entérica en áreas endémicas.
- Cuando las instalaciones de cultivo no están disponibles, la prueba de Widal es útil.
- Puede detectar infecciones causadas tanto por Salmonella Typhi como por Salmonella Paratyphi.
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