¿Cómo funciona la tinción de Ziehl-Neelsen?

 

La tinción de Ziehl-Neelsen fue creada por Franz Ziehl y posteriormente mejorada por Friedrich Neelsen a finales del siglo XIX. Esta técnica de tinción se utiliza para identificar bacterias ácido-alcohol resistentes, como las del género Mycobacterium (responsables de enfermedades como la tuberculosis y la lepra).

El proceso de tinción para AFB en Mycobacterium implica los siguientes pasos principales:

Aplicación de la tinción primaria (carbolfucsina): El portaobjetos que contiene el frotis bacteriano fijado por calor se cubre con una solución concentrada de carbolfucsina. Este colorante liposoluble penetra la pared celular cerosa de las micobacterias, rica en ácido micólico.

Calienta la cuchilla hasta que salga vapor (es importante no dejar que hierva).

Para facilitar la penetración del tinte, se aplica calor (en la técnica Ziehl-Neelsen) o se utiliza una mayor concentración de fenol (en la técnica Kinyoun). El calor o el aumento de la concentración de fenol ayudan a ablandar la pared celular lipídica, lo que permite que la carbolfucsina se una firmemente al citoplasma bacteriano. En este punto, todas las células presentes en el frotis, tanto las AFB como las no AFB, se teñirán de rojo.

Decoloración ácido-alcohol: Después de lavar el exceso de carbolfucsina, se aplica una solución ácido-alcohol (generalmente una mezcla de alcohol etílico y ácido clorhídrico al 3%).

NOTA: Ver horario específico del protocolo de su laboratorio.

Micobacterias (BAAR): Debido a la alta concentración de ácido micólico en sus paredes celulares, lo que les confiere un carácter hidrofóbico e impermeable, las micobacterias resisten la acción del alcohol-ácido. El colorante carbolfucsina queda retenido dentro de la célula y las bacterias mantienen la coloración roja.

Otras bacterias (no BAAR) y células huésped: Las bacterias que no tienen esta pared celular cerosa se blanquean fácilmente con el ácido-alcohol, perdiendo la coloración roja de la carbolfucsina y volviéndose incoloras.

Contratinción (azul de metileno o verde malaquita): para hacer visibles las bacterias que no son BAAR y las células de fondo, se aplica una segunda tinción de un color contrastante, como azul de metileno o verde malaquita.

Micobacterias (BAAR): Como ya están fuertemente teñidas de rojo por la carbolfucsina, no absorben significativamente la contratinción y permanecen rojas bajo el microscopio.

Otras bacterias (no AFB) y células huésped: Estas células, que han sido decoloradas por el ácido-alcohol, absorben la contratinción y aparecen azules (si se utilizó azul de metileno) o verdes (si se utilizó verde malaquita) bajo el microscopio.

En resumen, la técnica de tinción AFB aprovecha la propiedad única de la pared celular rica en ácido micólico de las micobacterias de retener fuertemente el colorante carbolfucsina incluso después del lavado con una solución ácida. Esto permite la identificación visual de estas bacterias como bacilos rojos sobre un fondo azul o verde, facilitando el diagnóstico de enfermedades como la tuberculosis y la lepra.